单酶切定向克隆
原理：利用限制性内切酶Bgl I GCCNNNN/NGGC，Sfi I GGCCNNNN/NGGCC等的特点，在N处引入不同序列达成单酶切定向的目的
步骤：
1. 改造载体，引入上诉酶的酶切位点
2. 靶序列两侧加同酶切位点不同序列的接头
3. 载体、靶序列 酶切，纯化
4. 连接、克隆
5. 抗生素抗性、PCR、杂交等方法筛选阳性序列
6. 测序确定靶序列无突变
注：适用于多个目的序列插入同一载体，要求定向的反复操作。如制备核酸检测试剂时的质控品，用病毒或噬菌体蛋白包裹DNA或RNA，做成假病毒防止降解；制备大批量靶序列的腺病毒、慢病毒载体等
楼主，你好，我们也是今天刚有这个想法，你是什么时候发现单酶切的可行性的？